|
Дисципліни кафедри, Напрямок наукової роботи, Гурток СНТ |
Дисципліни
1. Створення високопродуктивних методів фармацевтичного скринінгу нових лікарських речовин на основі бактеріальної біолюмінесценції.
2. Синтез, фізико-хімічні та біологічні властивості в ряді конденсованих азагетероциклічних сполук.
Кафедра має можливості для проведення досліджень у галузі:
спектрофотометрії видимого й ультрафіолетового діапазонів;
біо- та хемілюмінесценції;
біотестування з використанням світних бактерій;
аналітичної високоефективної рідинної хроматографії (HPLC).
Кафедра має власну колекцію світних бактерій, виділених з Чорного і Азовського морів, яка включає в себе 21 штам.
Два штами Vibrio fischeri F1 і Photobacterium phosphoreum Sq3 були депоновані в Українській колекції мікроорганізмів Iнституту мiкробiологii i вiрусологii НАН України та отримали свідоцтва про депонування: Vibrio fіscheri IMB B-7070, Photobacterium phosphoreum IMB B-7071 вiд 27 червня 2002 р.
Використання світних бактерій для біотестування
Протягом понад 20 років світні бактерії використовуються в аналітичних цілях. Це пов'язано з низкою принципових переваг, якими вони володіють. Фотобактерії являють собою живі автономні джерела видимого випромінювання, яке за певних умов може залишатися стабільним протягом тривалого часу. Рівень біолюмінесценції in vivo відображує загальну метаболічну активність клітини і залежить від їх кількості. Велике число фізико-хімічних та біологічних факторів, що впливають на зростання і дихання клітини, синтез білків і ліпідів, функціонування клітинних мембран і генів сімейства LUX, впливає на бактеріальну біолюмінесценцію і може бути виміряне за допомогою її реєстрації.
Методика визначення гострої токсичності: у кюветах люмінометра змішують 0,8 мл тестованого розчину в 1-3 % розчині NaCl, 100 мкл буферного розчину і 100 мкл суспензії світних бактерій. Реєструють зміну інтенсивності біолюмінесценції протягом 30-120 хвилин при відповідному температурному режимі. Рівень токсичності виражають у вигляді концентрації речовини (для розчинів індивідуальних речовин) або розведення (для розчинів невідомого складу), що викликає 20 % , 50 % або 80 % зниження інтенсивності бактеріального світіння по відношенню до контролю.
Методика визначення хронічної токсичності: рідке живильне середовище для фотобактерій у 10 разів розводять стерильним розчином 2,5 % NaCl і в отриманий розчин інокулюють нічну культуру світних бактерій при об'ємному співвідношенні 1:100 (бактерії : свіже середовище). Отриману бактеріальну суспензію розливають в 24-ямкові планшети по 1 мл в ямку і туди ж додають аналізований розчин. Планшет поміщають у термостат на 16-18 годин при оптимальній температурі, після чого здійснюють аналіз рівня біолюмінесценції в кожній лунці. Хронічну токсичність оцінюють за ЕК50 – ефективною концентрацією, що знижує біолюмінесценцію на 50 % (20 % , 80 % ) у порівнянні з контролем (бактерії без токсину) або за мінімально діючою концентрацією, що викликає 20 % зниження рівня біолюмінесценції в порівнянні з контролем (LEC — Lowest Effective Conentration).
|
|
