Отдел клинической иммунологии ЦНИЛ является научным подразделением КГМУ, штатные сотрудники которого выполняют как собственные научно-исследовательские проекты, так и участвуют в проведении совместных исследований с клиническими кафедрами КГМУ. Основные аналитические технологии, применяемые сотрудниками отдела при проведении таких исследований, представлены твердофазным иммуноферментным анализом и проточной лазерной цитофлуориметрией.
Твердофазный иммуноферментный анализ
Отдел клинической иммунологии ЦНИЛ укомплектован микропланшетным иммуноферментным анализатором StatFax- 2100 фирмы AwarenessTech. Inc. (USA). Данный прибор имеет микропроцессорное управление и позволяет производить как моно-, так и бихроматические измерения при четырех различных длинах волн (405 нм, 450 нм, 492 нм и 630 нм), что существенно расширяет возможности его практического использования. Кроме того, имеется все необходимое вспомогательное оборудование, необходимое для проведения различных коммерческих вариантов тИФА, а также высококвалифицированный персонал. Все это позволяет выполнять на базе отдела клинической иммунологии ЦНИЛ медико-биологические исследования любого уровня с использованием самых разнообразных коммерческих тест-систем для тИФА.
Ведущим направлением собственных научных исследований, проводимых сотрудниками отдела клинической иммунологии ЦНИЛ совместно с многими клиническими кафедрами КГМУ, является изучение роли антиэндотоксинового иммунитета в физиологии и патологии человека. Для обеспечения методологической базы этих исследований сотрудниками отдела был разработан ряд эксклюзивных лабораторных методов, основанных на технологии тИФА, и позволяющих объективно характеризовать некоторые наиболее важные параметры, отражающие состояние антиэндотоксинового иммунного статуса:
Кроме того, разработаны и применяются некоторые другие аналитические тесты, также основанные на технологии тИФА.
Сотрудники отдела клинической иммунологии ЦНИЛ могут также проводить ряд других анализов, достаточно часто используемых при проведении научных исследований
Помимо перечисленного выше, на базе имеющегося оборудования сотрудники отдела клинической иммунологии ЦНИЛ при необходимости могут выполнять широкий спектр исследований с использованием большинства коммерчески доступных тест-систем для тИФА.
Проточная лазерная цитофлуориметрия
Проточная лазерная цитофлуориметрия (ПЛЦ) относится к числу наиболее информативных и современных многопрофильных технологий, используемых при проведении разнообразных медико-биологических исследований. Метод ПЛЦ основан на измерении оптических характеристик индивидуальных клеток, которые по отдельности движутся в ламинарном потоке в проточной кварцевой кювете и пересекают сфокусированный специальной оптикой световой пучок, не касаясь стенок этой кюветы. Источником света могут быть различные типы лазеров, ультрафиолетовая лампа или же их комбинация. Проходя через измерительную кювету, клетки рассеивают свет в различных направлениях. Кроме того, свет определенной длины волны возбуждает молекулы флуоресцентных меток, которые в результате предварительной обработки селективно связываются с различными клеточными компонентами; при этом может происходить одновременное возбуждение нескольких разных флуорохромов, что позволяет одновременно оценивать несколько изучаемых параметров. Световые сигналы преобразуются в электрические импульсы фотоэлектронными умножителями, оцифровываются и затем обрабатываются специализированным программным обеспечением, под управлением которого работает любая конкретная модель проточного лазерного цитофлуориметра. Получаемые результаты записываются в файл специального формата и отображаются в графическом виде на встроенном дисплее проточного цитофлуориметра. Современные проточные лазерные цитофлуориметры позволяют одновременно измерять несколько различных параметров: переднее светорассеяние под малыми (до 10 °С) углами (Forward-Scattered Lіght, FSC), боковое светорассеяние под углом 90 °С (Sіdе-Scattered Lіght, SSC], а также интенсивность флуоресценции при разных длинах волн. Анализ FSC и SSC позволяет дифференцировать различные клеточные субпопуляции по размерам, форме, состоянию клеточной мембраны и характеристикам цитоплазмы, тогда как применение специфических флуоресцентных меток дает возможность исследовать не только экспрессию каких-либо мембранных структур, но и характеризовать функциональное состояние анализируемых клеток.
Методологическая база ПЛЦ интенсивно развивается, и на сегодняшний день ее применение включает не только иммунофенотипирование (анализ субпопуляционного состава лимфоцитов и дифференциальная диагностика гемобластозов), но и определение содержания гемопоэтических стволовых клеток (CD34+) при трансплантациях костного мозга, анализ плоидности ДНК и исследование клеточного цикла, изучение внутриклеточной экспрессии цитокинов, дифференциальная диагностика опухолей (в том числе солидных), анализ пролиферативного статуса опухолевых клеток, определение антигена HLA-B27, исследование механизмов апоптоза и т.д. Новые приложения ПЦЛ, основанные на принципах многоцветного анализа, включают в себя определение антиген-специфических клеток с использованием технологии тетрамеров, регистрацию внутриклеточного рН, а также внутриклеточной концентрации цитокинов и других регуляторных молекул; мультиплексный анализ содержания цитокинов в различных биологических жидкостях и супернатантах клеточных культур; оценку фагоцитарной активности и продукции активированными моноцитами и нейтрофильными гранулоцитами реактивных форм кислорода; определение в системе invitroчувствительности пациентов к аллергенам и лекарственным препаратам, а также многое другое.
Используя в качестве источника света УФ-лампу, можно проводить анализ плоидности ДНК и выявлять атипичное содержание ДНК в индивидуальных клетках с высокой разрешающей способностью, что находит широкое применение в онкологических исследованиях. Как известно, опухоли различных органов на разных стадиях развития характеризуются различным соотношением диплоидных и ануэплоидных клеточных популяций и присутствием различных клеточных линий внутри опухолевой ткани. Для некоторых классов новообразований эти параметры могут быть использованы для обнаружения новообразований на ранней стадии и оценки эффективности проводимой терапии.
Одним из наиболее важных направлений применения ПЛЦ считаются исследования, связанные с терапевтическим применением полипотентных стволовых клеток. Мембранный антиген CD34 является маркером полипотентных кроветворных стволовых клеток, в связи с чем подсчет абсолютного числа CD34+-клеток в клеточных суспензиях с помощью ПЛЦ рассматривается в качестве “золотого стандарта” при оценке их количества.
По всем вопросам, связанным с проведением конкретных анализов или же участием в совместных научных исследованиях, можно обращаться по E-mail(uu4jey@csmu-edu.com.ua) или по телефону 0652-554-896 (с 1400 до 1600).
